D. Yu. Ryazantsev, E. M. Chudinova, L. Yu. Kokaeva, S. N. Elansky, P. N. Balabko, G. L. Belova, S. K. Zavriev
Ko te harore o te hemtopathogenic Colletotrichum coccodes he mate kino i roto i nga riwai me nga tumato e mohiotia ana ko te antracnose me te kūmara. Na nga ahuatanga morphological, he uaua ki te wehewehe mai i nga mate i puta mai i etahi atu momo rauropi; i runga i nga hua Tomato kakariki, kaore pea te mate i te mate, me te whakaatu i a ia ano i nga hua whero maoa. Mo te whakatau tere me te tika o te pathogen, ka whakaatuhia he punaha whakamatautau PCR mo te waa tuuturu. Hei whakawhanake i tetahi punaha whakamatautau, i whakatauhia te raupapa nucleotide o te ira glycerol triphosphate dehydrogenase ira 45 C. coccodes ka wehea mai i nga kūmara potato i nga rohe rereke o Russia.
I runga i nga kitenga i whiwhihia me te wetewete i nga raupapa rite o etahi atu momo e waatea ana i te papaanga GenBank, i hangaia nga momo momo-motuhake me te uiui mo nga C. coccodes. Hei tirotiro i te kiko o te punaha whakamatautau i hangaia, i whakahaerehia te PCR me te DNA i wehea mai i nga ahurea maama o te 15 momo rereke o te harore me te harore saprotrophic e hono ana ki te tipu tipu me te potato (Fusarium oxysporum, F. verticillium, Phomopsis phaseoli, Alternaria alternata, Helminthosporium solani, Colletotrichum coccodes Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Helminthosporium solani, Phomopsis phaseoli, Neonectria radicicola, Rhizoctonia solani, Penicillium sp., Cladosporium fulvum, C. cladosporioides). Ko te noho mai o Colletotrichum coccodes DNA i whakatauhia i te paepae paepae 20–27, i kitea etahi atu momo i muri i te 40 huringa kaore ranei i kitea. Ma te punaha whakamatautau e ahei te kite totika i nga hononga a te C. coccodes DNA he nui ake i te 0.01 ng / mm3 i te ranunga PCR kua taatuhia. Ma te whakamahi i te punaha whakamatautau kua whanaketia, i tirotirohia te aroaro o nga coccodes C. i roto i nga rau tōmato me nga tohu o nga mate harore me nga kōpura potato kaore he tohu o waho o te maui i tirotirohia. Ko nga rau me nga tohu o te mate harore i kohia mai i nga waahanga rereke e rua i te Rohe o Krasnodar, he kōpura - mai i nga mara i nga rohe o Kostroma, Moscow, Kaluga, Nizhny Novgorod. I kitea tetahi rau Tomato kei roto nga C. coccodes DNA i te rohe o Krasnodar; he nui te kitea o te DNA o tenei tukumate i kitea i roto i nga tauira e 5 o te kūmara i whakatipuhia i te rohe o Kostroma, Moscow, Kaluga.
Whakataki
Ko te harore o te puninga Colletotrichum he hemopathogens morearea e pa ana ki nga pata, huawhenua, otaota, hua koiora me nga tipu kiko. Ko tetahi o nga momo katoa o tenei puninga, Colletotrichum coccodes (Wallr).
Ko Hughes, te kaihoko o te antracnose me te pango o te riwai me te tōmato, ka mate i te maha o era atu tipu o te whanau Solanaceae, tae atu ki. tarutaru (Dillard, 1992). Ka pangia e C. coccodes nga waahanga o raro o te tipu, nga take o te kakau, nga rau, me nga hua (Andrivon et al., 1998; Johnson, 1994). I runga i te kiri o nga kūmara potato i pangia, ka kitea te whanaketanga o nga waahi hina me nga waahanga kaore e tino marama ana, e maarama ana nga tohu pango o te mokomoko me te microsclerotia. I te wa e penapena ana, ka taea e te mariao me nga mea ngohengohe te whakakakahu ki te ngongo o te kūmara, arā. ka uru te mate ki te waahanga antracnose, engari, he tino onge.
I te wa ano, ko nga tohu o te antracnose (te kiri kiri me nga ira pango iti) he mea noa kei runga i nga hua o te Tomato. I runga i nga rau, ko nga tohumate o te C. coccodes ka puta mai he kikorangi parauri, he paina e te kiko kowhai (Johnson, 1994).
Ko te whanaketanga o te pango pango i runga i nga kūmara e pahua ana i o ratou ahua, e tino whakahua ana i te wa e hokona ana te riwai kiri whero kua horoia. Ko te whakapakeke kiri ka hua ake te whakaetonga me te piki ake o te rahinga rokiroki (Hunger, McIntyre, 1979). Ko te whara ki etahi atu tipu ka tipu nga hua, i tuhia i te whenua tuwhera me te kati (Johnson, 1994; Tsror et al., 1999). Ko nga mate na C. coccodes i tino kitea i nga rohe hua-riwai katoa o te ao, tae atu ki a Russia (Leesa, Hilton, 2003; Belov et al, 2018). He uaua te aukati i enei mate na te kore o te painga o nga fungicides e noho ana ki te C. coccodes me te koretake o nga momo aukati (Panuihia, Huna, 1995).
Ka mau tonu te inoculum o te C. coccodes ki nga kūmara purapura (Panuihia, Huna, 1988; Johnson et al., 1997), nga purapura tomato (Ben-Daniel et al., 2010), ka ora mo te wa roa ki te oneone, ki nga otaota otaota (Dillard, 1990 ; Dillard, Cobb, 1993) me nga tarutaru (Raid, Pennypacker, 1987). Ko nga mahi a te maha o nga kaituhi (Panui, Huna, 1988; Barkdoll, Davis, 1992; Johnson et al., 1997; Dillard, Cobb, 1993) e whakaatu ana ko te whanaketanga o te tahumaero i roto i nga riwai me nga tumato e pa ana ki te uru mai o te inoculum ki te purapura me te oneone Na reira, ki te whakaiti i nga ngaronga mai o te mate, he mea tika kia taatari (tae atu ki te rahinga) nga purapura o te harore i roto i nga momo purapura, i te oneone, i nga purapura riwai riwai me nga purapura potato i whakatakotoria hei penapena. Ko nga taatai morphological i roto i te oneone me nga mea whakato ka taea te whakahaere ma te tae mai o te microsclerotia, engari, ka kitea ano i etahi atu momo harore.
Ko nga tohu i runga i nga kūmara he rite tonu ki te paku hiriwa i ahu mai i te harore Helminthosporium solani. Ko te wehenga o nga coccodes o Colletotrichum me te Helminthosporium solani ki roto i te ahurea parakore he uaua, he roa te waa na te puhoi o te tipu o te kaupapa matūkai. Kia mohio wawe ai i nga kohinga a Colletotrichum, me whakamahi i nga tikanga taatai taputapu. Ko te tikanga tino pai ko te tauhohenga mekameka polymerase (PCR) me tona whakarereketanga - PCR-waahi tuuturu. I tenei wa, he punaha whakamatautau i hangaia e nga Kairangahau o Ingarangi (Cullen et al., 2002) mo te rohe ITS1 o te rDNA e whakamahia ana i Uropi me te United States. Ko tana whakamahinga kua whakaatuhia he hua pai ki te wetewete i nga wehe o Ruhia (Belov et al, 2018). Heoi, he rereke te rereke o te C. coccodes ana ko te kitenga mai i te raupapa DNA kotahi ka hua ake nga hua kino kino. Mo te taatari pono ake, me wetewetehia nga raupaparanga DNA motuhake-momo, me te mea i hangaia e matou he punaha whakamatautau taketake e ahei ai te tautuhi i te C. coccodes ma te raupapa o te ira glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase.
Nga rauemi me nga tikanga
Hei aromatawai i te whaihua me te kiko o nga punaha whakamatautau i hangaia, i whakamahia e maatau nga ahurea maama o te 15 momo harore, ka wehea e nga kaituhi mai i nga tauira rau o te rau me nga hua o te Tomato, te kūmara potato (Ripanga 1). Hei wehe, ko nga okana tipu me nga tohu o te mate harore i tangohia, kaua e neke atu i te kotahi okana mo ia ngahere.
He poro o te kūmara me te kiri, tetahi poro o te hua totato, me tetahi rau e pangia ana ka whakatakotoria ki raro i te miihini karu karu, i muri iho ka tukuna te mycelium, te puaatahi, te waahanga kiko ranei ki tetahi momo agar (i roto i te agar wort) i roto i te rihi Petri me te ngira kua wero. I penapenahia nga mokemoke ki runga i te agar slant i nga ngongo whakamatautau i te 4 ° C.
Ko nga tauira o nga rau tōmato hei tirotiro me nga tohumate o nga mate harore i muri tonu o te kotinga (i te mara) i whakanohoia ki roto i te 70% waipiro waipiro e puritia ana tae noa ki te wehenga o te DNA. I tukuna nga kōpura riwai ki te whare taiwhanga, he kiri tihorea (2 × 1 cm) mai i a ratau, ka whakatotoka ana ki te –20 ° С. Penapena kia tiotio tae noa ki te wehenga o te DNA.
Ko nga ahurea harore harore mo te wehe o te DNA i whakatipuhia i roto i te mahinga peehi wai. Ko te mycelium o te harore i tangohia mai i te wai waipiro, i maroke ki runga pepa pepa, whakatotoka ana ki te hauwai waipiro, homogenized, i whakauruhia ki roto i te paati CTAB, i purea ki te chloroform, he mea whakato ki te ranunga o te isopropanol me te 0.5 M potassium acetate, ka horoia kia rua ki te 2% waipiro. Ko te DNA i puta ka rewa ki te wai kua whakahekehia, ka penapena ki te –70 ° С (Kutuzova et al., 20). I whangangahia te kukume DNA ma te whakamahi i te kete tatau DNA HS mo te DNA taapara rua i runga i te Qubit 2017 (Qiagen, Tiamana). Ko nga tauira waipiro me te hukapapa i kitea ki te hauota wai, katahi ka mahia te tangohanga DNA penei i runga ake nei (mo te mycelium o nga ahurea harore parakore).
Ripanga 1. Te putake o nga taumahatanga harore whakamahia
Ingoa Harore | Whakato, okana | Tuhinga o mua |
---|---|---|
Colletotrichum coccodes 1, C. coccodes 2, C. coccodes 3, Ilyonectria crassa, Rhizoctonia solani | rīwai potato | Te rohe o Kostroma, nga kūmara potato o te whakatupuranga tuatahi o te mara, ngaki Whero Scarlett |
Coccodes Colletotrichum 4 | pepa rīwai | Rep. Mari El, Yoshkar-Ola |
Helminthosp hall solani | rīwai potato | Magadan rohe, pos. Teneti, kūmara kūmara |
Whare nui piha | rau Tomato | Rohe o Moscow, he tomati whai hua nui |
Alternaria tomatophila | hua tōmato | tukuna e nga kaimahi o te taiwhanga mycology me te Phytopathology o te Katoa-Russian Rangahau Institute o Whakatupato Whakatupato |
Fusarium verticillium, Phomopsisphaseoli, Alternaria alternata, Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Cladosporium cladosporioides, Acrodontium luzulae, Penicillium sp. | hua tōmato | Te Rohe o Krasnodar, te rohe o Krymsky, te tiikiri Kirikiri |
Fusarium oxysporum | pakiaka witi | Moscow rohe |
I mahia te PCR i runga i te DTprime amplifier (DNA-Hangarau). Mo te PCR, ko nga tiimatanga taketake me te tirotiro mo te rohe-momo momo o te ira glycerol triphosphate dehydrogenase i whakamahia: ko te Coc70gdf tuatahi -TCATGATATCATTTCTCTCACGGCA, ko te kokiri o mua Coc280gdr - TACTTGAGCATGTAGGCCTGGGT1). Ka whakarahihia e nga timatanga te rohe 213 bp.
I tangohia e te tauhohenga te 50 ng o te katoa o te DNA (i te wetewete i nga rau me nga kūmara) me te 10 ng (i te wetewete i te DNA o nga ahurea ma harore) Ko te ranunga tauhohenga (35 μl) i wehea e te paparanga paraffin ki nga waahanga e rua: ko te mea o raro (20 μl) e 2 μl o te 10 × parenga urupare (750 mM Tris-HCl, pH 8.8; 200 mM (NH4) 2SO4; 25 mM MgCl2; 0.1% Runga- 20), 0.5 mM o ia deoxynucleotide triphosphate, 7 pmol o ia tiimatanga, me te 4 pmol o te tirotirohia o te rauropi; ko te mea o runga he 1 μl o te 10 × PCR whakato me te 1 U o Taq polymerase.
Ko te wehenga o te ranunga ki te paraffin ka taea te penapena i nga ngongo mo te wa roa i te paemahana e 5 ° C ana kia pai te tiimata mo te PCR i muri i te whakamahana mo nga meneti 10 i te mahana i runga ake i te 80 ° C. I mahia te PCR kia rite ki te kaupapa e whai ake nei: 94.0 ° C - 90 s (1 huringa); 94.0 ° C - 30 s; 64.0 ° C - 15 s (5 huringa); 94.0 ° C - 10 s; 64.0 ° C - 15 s (45 huringa); 10.0 ° C - penapena.
Nga hua me nga korerorero
Ko nga raupapa o te ira glycerol triphosphate dehydrogenase i whakatauhia i roto i nga momo 45 ka wehe mai i nga rau, i nga kakau, i nga kūmara potato, me nga hua Tomato (Kutuzova, 2018) i etahi rohe o Russia. Ko nga raupapa ako o nga taumahatanga katoa ka tohatohahia kia 2 nga roopu e rereke ana i nga waahanga e rua. Ko nga raupapa nucleotide o nga mangai o nga roopu e rua i raro i nga tau KY496634 me KY496635 ka whakatakotoria ki GenBank.
Ko nga primers coc70gdf, coc280gdr me te tirotirohanga cocgdz i hangaia i runga i ta raatau kaupapa i tirohia ma te whakamahi i te kaupapa BLAST (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast) i runga i nga raupapa katoa o te ira glycerol triphosphate dehydrogenase o nga momo o te puninga Colletotrichum me etahi atu rauropi e waatea ana i te papaarangi GenBank.
Kaore i kitea he rohe DNA o etahi atu rauropi tino homologous ki nga tiimatanga me te tirotiro.
I tirotirohia te maatauranga o te punaha whakamatautau ma te whakamahi tauira me nga rereketanga rereke o C. coccodes DNA, DNA o te riwai riwai i pangia e te antracnose (i kohia i te 2017 i Mari El, momo Whero Whero), me te kiri o nga korere kua pangia e te pango pango (kohia i te rohe o Kostroma, momo Whero Whero, Ripanga 2). Hei whakaū i te kitea o te DNA ki roto i nga kūmara me nga rau potato, i wehea ke atu nga taumaha C. coccodes ki a raatau ki nga ahurea ma.
Ko nga hua o te maatauranga taapiri o te punaha whakamatautau e whakaatu ana ka taea te whakamahi kia pai te tirotiro i te aroaro o te C. coccodes DNA i roto i tetahi tauira mena ko te nuinga o nga korero kei roto i te ranunga PCR he nui ake i te 0.05 ng. He pai rawa tenei mo te rapu, na te mea kotahi te sclerotia kei roto i te 0.131 ng, a ko tetahi purongo e 0.04 ng ng DNA (Cullen et al., 2002). Ko te punaha whakamatautau i hangaia e te roopu Ingarihi (Cullen et al., 2002) i whakaatu i te awangawanga rite (huringa paepae 34 i te 0.05 ng DNA me te 37 i te 0.005 ng).
Ko te wetewete i nga tauira maori kei roto ko nga C. coccodes i roto i nga keehi katoa i taea ai te whakaatu pono i te aroaro o te tauira (Ripanga 2). Ko te tikanga whakaarohia mo te wehe o te DNA i pa ano ki te wetewete i nga tauira tipu maori.
Ripanga 2. Te whakatau i te maaramatanga o te punaha whakamatautau kua whakaarohia mo te tautuhi i nga kohinga a Colletotrichum mo te wa-roa PCR
Tauira | Te nui o te DNA kei roto i te tauira *, ng | Huringa Paepae | Kitenga C. coccodes |
---|---|---|---|
Mycelium Colletotrichum coccodes | 50 | 21.3 | + |
5 | 25.7 | + | |
0.5 | 29,7 | + | |
0.05 | 33.5 | + | |
0.005 | 40 | - | |
0.0005 | 42.8 | - | |
0.00005 | - | ||
Peera kōpura 1 | 50 | 32 | + |
Peera kōpura 2 | 50 | 30 | + |
Peera kōpura 3 | 50 | 31.5 | + |
Rau potato | 50 | 29.5 | + |
Panui. * I roto i te ranunga o nga hua PCR.
I whakamatauria te motuhake o te punaha whakamatautau ki nga tauira DNA i tangohia mai i nga momo harore 15. Ko nga momo harore katoa i wehea e nga kaituhi mai i nga hua e pangia ana e te hauora, me nga rau o te tomato, nga kūmara potato; kotahi te riaka i wehea mai i te pakiaka witi (Ripanga 1). I waenga i nga momo ka wehea mai i te mata o nga hua, kei kona ano etahi momo kaore i te pathogenic mo te tomato (hei tauira, Phellinus ferrugineovelutinus).
I whakaatuhia e nga rangahau ko te C. coccodes DNA i kitea i te paepae paepae 20–27, i etahi atu momo harore kaore i kitea i hoatu he tohu ranei i muri i te huringa 40, ka taea te kii mo te tangi o te haruru (Papa 3).
Ripanga 3. Te tirotiro i te punaha whakamatautau mo nga momo harore e rua
Ingoa Harore | Huringa Paepae |
Coccodes o Colletotrichum 1 | 20.9 |
C. kotingotingo 2 | 22.6 |
C. kotingotingo 3 | 23 |
C. kotingotingo 4 | 22 |
Fusarium oxysporum | > 40 |
F. verticalillium | > 40 |
Rhizoctonia solani | > 40 |
Phomopsis phaseoli | > 40 |
Alternaria alternata | > 40 |
A. tomatophila | > 40 |
Helminthosp hall solani | > 40 |
Phellinus ferrugineoveltinus | > 40 |
Stemphylium vesicarium | > 40 |
Ilyonectria crassa | > 40 |
Cladosporium cladosporioides | > 40 |
C. whakahou | > 40 |
Acrodontium luzulae | > 40 |
Penicillium sp. | > 40 |
Panui. * Ko te nui o te DNA i roto i nga tauira katoa ko te 10 ng.
I whakamahia te punaha whakamatautau i mohiotia hei tohu i nga momo coccodes C. i roto i nga tauira rau tōmato me nga tohu o te tukumate necrotrophic me nga kūmara potato purapura kaore he tohu e kitea ana. Mo te rangahau, i tangohia e maua nga kohua purapura o nga momo momo tipu i te rohe o Kostroma, Moscow, Kaluga, Nizhny Novgorod. Ko te aroaro o te C. coccodes DNA i whakaarohia he nui i roto i nga tauira, i te wetewete i kore te huringa paepae i nui atu i te 35. I tohua tenei uara paepae i runga i te whakatau pono o te 0.05 ng C. coccodes DNA (huringa paepae 33.5, Ripanga 2) me te meka i nga huringa paepae i runga ake i te 40, i kitea he DNA kiko kore o etahi atu momo harore. Na tenei huarahi, i kitea te tino nui o te C. coccodes DNA i roto i nga tauira e 5 o te kūmara i whakatipuhia i Kostroma, Moscow, i nga rohe o Kaluga me tetahi rau tomato i te rohe o Yeisk o te rohe o Krasnodar (Papa 4, 5).
Ripanga 4. Te kitenga o nga kohinga colletotrichum i runga i nga kūmara potato *
Tau tauira | Potato momo | Te tihi o te tipu | Kitenga C. coccodes | Huringa Paepae |
---|---|---|---|---|
1 | Ngangana Whero | Rohe Kostroma | + | 35 |
2 | + | 35 | ||
3 | - | 38 | ||
4 | Sante | Moscow rohe | + | 34 |
5 | - | |||
6 | - | 41 | ||
7 | - | 41.8 | ||
8 | + | 30 | ||
9 | Zhukovsky wawe | Moscow rohe | - | 40.5 |
10 | - | 40.6 | ||
11 | - | |||
12 | Ngatahi | Kaluga rohe. | + | 34.3 |
13 | - | 38.4 | ||
14 | Fantasy | Kaluga rohe. | - | |
15 | Gala | Nizhny Novgorod rohe. | - | |
16 | - |
Panui. * Ko te nui o te DNA i roto i nga tauira katoa ko te 50 ng.
Ripanga 5. Te kitenga i nga kohinga colletotrichum i runga i nga rau Tomato *
Tau tauira | Te tihi o te tipu | Kitenga C. coccodes | Huringa Paepae |
---|---|---|---|
1 | Te Rohe o Krasnodar, Takiwa o Crimean | - | |
2 | - | ||
3 | - | ||
4 | - | 45 | |
5 | - | ||
6 | - | ||
7 | - | ||
8 | - | ||
9 | Te Rohe o Krasnodar, Takiwa o Yeisk | - | 39.2 |
10 | - | 40.8 | |
11 | - | ||
12 | - | 41.6 | |
13 | - | 40 | |
14 | - | 41 | |
15 | - | 41.9 | |
16 | - | ||
17 | - | ||
18 | - | 40.3 | |
19 | - | ||
20 | - | ||
21 | + | 34.5 | |
22 | - | ||
23 | - |
* Ko te nui o te DNA i roto i nga tauira katoa ko te 50 ng.
Ko te punaha whakamatautau i hangaia e taatau, kaore i te iti ake i tera i whakawhanakehia e nga Kairangahau o Ingarangi (Cullen et al., 2002) i roto i te mohio me te motuhake, he pai hoki mo te wetewete i nga tauira tipu. Na tana tono mo te wetewete i nga kūmara purapura i taea ai te tautuhi i te C. coccodes DNA i roto i nga kūmara me te kore he tohu o te kino i waho me te wetewete angitu i te pangia o nga rau.
I tenei wa, kaore ano kia mahia he aromahara mo nga kūmara potato mo te urunga o C. coccodes i Russia. Ko ta maatau rangahau tuatahi i whakaatu mai i te 16 nga kohinga purapura whakamatauhia i whakatipuhia i roto i nga rohe rereke o te Ruhia o Ruhia, e 5 nga kaitautoko C. E whakaatu ana tenei ko te pango o nga kūmara potato he mate riwai noa i Russia, ana ko tana mahi ki te whakaheke i te rahinga me te kounga o te hua riwai ka whakahawea.
Ko te wetewete i nga rau tōmato i kitea he kaha te tae mai o te C. coccodes DNA ki roto i te rau kotahi mai i te rohe o Yeisk o te Rohe o Krasnodar. I mua atu, i te wa e tirotirohia ana nga mara tomati i te tonga o Russia ma te whakamahi i te punaha whakamatautau a Ingarangi (Cullen et al., 2002), i kitea he rau kei roto nga C. coccodes, a i etahi mara ka kitea he nui te rahi o nga rau i pangia e nga C. coccodes (Belov et al., 2018). I nga Krasnodar me nga Teritori o Primorsky, te Rohe o Moscow, i kitea e matou nga hua o te Tomato, i taea ai e matou te wehe i nga ahurea maamaa o nga C. coccodes. Akene ka nui ake te whanui o te C. coccodes ki runga i te tomato i Russia kaore i te whakaponohia inaianei, ana ka whakahawea ano hoki ki te kino.
No reira, tae mai ki tenei ra, he nui nga korero kua kohia mo te tohatoha whanui o te C. coccodes ki runga i nga riwai me nga tumato.
Kia maarama ake ai ki te mahi a tenei harore ki te whanaketanga o nga riwai me nga mate tomato, he mea tika kia aro turukihia te horahanga o Ruhia, te rangahau i nga mahi o te mate o te oneone me te purapura, me te mahi o te pango i nga ngaronga i te wa e penapena ana. Ko te whakamahinga o te taatai PCR ka kaha ki te whakahaere i tenei mahi, a, ko te whakamahinga o nga punaha whakamatautau e rua ka tino whakanui i te tika o te wetewete.
I tautokohia tenei mahi e te tahua mai i te Russian Science Foundation Nama 18-76-00009.
I whakaputahia te tuhinga ki te hautaka "Mycology and Phytopathology" (pukapuka 54, Nama 1, 2020).